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核酸的基础知识:核酸分为脱氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA),其中RNA又可以根据功能的不同分为核糖体RNA(rRNA),信使RNA(mRNA)和转移RNA(tRNA)。DNA主要集中在细胞核内,线粒体和叶绿体中,而RNA主要分布在细胞质当中。核酸中因为嘌呤碱和嘧啶碱具有共轭双键,所以核酸具有紫外吸收的特性,DNA钠盐的紫外吸收在260nm附近,其吸光率以A260表示,在230nm处于吸收低谷,因此可以使用紫外分光光度计对核酸进行定量及定性测定。核酸为两性电解质,相当于多元酸,可以使用中性或偏碱性的缓冲液使核酸解离成阴离子,置于电场中向阳极运动,这就是电泳的原理。核酸提取纯化原则和要求:核酸样品中不应存在对酶有克制作用的有机溶剂和高浓度的金属离子。长沙全血核算提取设备哪家质量好
核酸提取方法简介:煮沸裂解法主要用于DNA的手工提取,分为一步法和两步法,一步法得到的DNA含有较多小分子克制物。两步法师一步在样本中加入沉淀剂后离心弃上清,以去除小分子克制物并沉淀病du颗粒,第二部加入裂解液后煮沸,以释放DNA及沉淀残留蛋白等大分子克制物,离心取上清即为达到的DNA。此方法的操作相对简单,成本低,但抗干扰能力差,不利于自动化的操作。TRIzol使样本匀浆化,细胞裂解,溶解细胞内含物,同时因含有RNase克制物可保持RNA的完整性。再加入氯仿离心后,溶液分为水相和有机相,RNA在水相中,取出水相用异丙醇沉淀可回收RNA,用乙醇沉淀中间层可回收DNA,用异丙醇沉淀有机相可回收蛋白质,其较大特点是可同时分离一个样本的RNA、DNA、蛋白质,但由于使用有机溶剂,气味比较大。济南核算提取试剂盒批发厂家利用特殊的核酸释放剂,在常温下快速裂解病原体释放核酸。
核酸检测注意事项:**提醒,在做核酸检测前2小时尽量避免进食,以免引起呕吐;采样**0分钟不应吸烟、喝酒、咀嚼口香糖等;检测者需要正确佩戴口罩,检测前取下口罩,检测后立即戴好,可准备一个备用口罩,污染后方便随时更换。在采集鼻咽拭子前检测者应告知采集人员是否鼻中隔弯曲及鼻腔手术史,过程中可能出现鼻部酸痒感,刺激打喷嚏,可立即用纸巾或手肘遮挡;鼻咽拭子采集后可能出现少量鼻腔出血,一般不需要特殊处理,如出血量较多请及时到医院进行处理。在采集口咽拭子时检测者头后仰,张口发出“啊”音,有助于暴露咽喉,但过程中会出现刺激性干咳、恶心、呕吐等症状,检测者可配合采集人员尽量放松、深呼吸;核酸检测前后都需要注意手部卫生,可使用免洗手消毒液或免洗酒精擦拭双手。
详解磁珠法核酸提取过程中的常见误区:试剂使用的越多,提取效果越好:裂解效果不好?多加点裂解液。洗涤效果不好?多加点洗涤液。这是很多客户在使用试剂盒中的惯性思维。但是对于磁珠法而言,每增加一部分液体体积,就减少了更多的磁珠碰撞几率,而降低磁珠碰撞几率,会导致吸附率的大幅度下降。所以很多时候,虽然增加裂解液和洗涤液确实能够起到增强裂解和增强洗涤的作用,但磁珠法提取的中心是磁珠吸附核酸的效率,无法保证磁珠碰撞效率是不能保证核酸提取效率的,所以单纯增加试剂使用量改善提取效果并不一定完全有效。质粒抽提方法即去除RNA,将质粒与细菌基因组 DNA分开,去除蛋白质及其它杂质。
提取核酸需要使用pH 8.0的Tris水溶液饱和酚是为什么:苯酚是一种有机溶剂,具有强烈的变性蛋白质的作用,但它可以微溶于水,会残留在DNA所在的水相中,影响DNA的纯度。苯酚使用前需用Tris溶液进行饱和,以减少抽提DNA过程中吸收水分和损失DNA。 Tris溶液调节至pH 8.0,可以使DNA更加稳定地存在于水相中。此外,保存在4℃冰箱中的苯酚,容易被空气氧化变成粉红色,形成醌类物质而易使DNA降解,因此氧化的苯酚不能用于提取核酸,应使用pH 8.0的Tris水溶液再次饱和后使用,较好分装在棕色试剂瓶里,上面覆盖一层Tris水溶液或TE缓冲液,以隔绝空气。注意事项:严禁用手或其他物品触及拭子采样冠、棉签的前端,以免造成污染,影像检测结果。广州全血核算提取试剂盒哪家质量好
注意事项:检测者要正确佩戴口罩,同时留有一条口罩备用。长沙全血核算提取设备哪家质量好
根据提取原理不同划分:①采用离心柱法的仪器离心柱法核酸提取仪主要采用离心机和自动移液装置相结合的方法,通量一般在1-12个样本,操作时间和手工提取差不多,并不能提高实际工作效率,且价格昂贵,不同型号仪器的耗材也不能通用,*适合经费充足的大型实验室使用。② 采用磁珠法的仪器以磁珠为载体,利用磁珠在高盐低PH值下吸附核酸,在低盐高PH值下与核酸分离的原理,再通过移动磁珠或转移液体来实现核酸的整个提取纯化过程。由于其原理的独特性,所以可设计成很多种通量,既可以单管提取,较大提高了实验效率,且成本低廉,因而可以在不同实验室使用,是目前市场上的主流仪器。搭配不同种类的磁珠核酸试剂组,可以快速提取动植物组织、血液、体液、刑事检体等样品中的DNA和RNA。长沙全血核算提取设备哪家质量好